Вплив сульфату заліза на стан прооксидантно-антиоксидантної системи у хворих на залізодефіцитну анемію на тлі ревматоїдного артриту

Ревматоидный артрит (РА) — хроническое заболевание, характеризующееся развитием воспалительного процесса синовиальной оболочки и формированием костно-деструктивных изменений суставов, в патогенезе которого значительную роль играет активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), дезорганизация антирадикальной защиты и развитие оксидантного стресса (Cheng M.L. et al., 2005; Мікулець Л.В., Волошин О.І., 2011). В свою очередь, оксидантный стресс может приводить к повреждению синовиальных клеток, разрушению хряща и эрозии костной ткани. Железодефицитная анемия (ЖДА), развивающаяся у 30–70% больных РА, также сопровождается активацией процессов свободнорадикального окисления, что усугубляет тяжесть суставного процесса (Коваленко В.М. та співавт., 2010). При этом применение у таких больных препаратов железа, с одной стороны, способствует коррекции анемии, а с другой — может приводить к еще большей активации ПОЛ. Однако состояние прооксидантно-антиоксидантной системы у пациентов с ЖДА на фоне РА и ее изменение на фоне терапии препаратами сульфата железа изучены недостаточно.

Цель исследования — изучить влияние сульфата железа на состояние прооксидантно-антиоксидантной системы у больных ЖДА на фоне РА.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под наблюдением находились 42 пациентки (средний возраст — 43±9 лет), болеющих РА на протяжении 3–15 лет (9±6 лет). У 24 из них (1-я группа) диагностирована ЖДА (ВОЗ, 2001), остальные (2-я группа) имели нормальный уровень гемоглобина. У 20 (86%) больных была анемия легкой степени тяжести — уровень гемоглобина — 112,8±3,6 г/л (1-я группа), у остальных — средней — уровень гемоглобина — 86,4±2,1 г/л (1б группа). В контрольную группу вошли 20 практически здоровых лиц (женщины 43±8 лет с гемоглобином 137,4±8,2 г/л).

Все больные РА принимали метотрексат в средней дозе 9,6±2,4 мг/нед в сочетании с фолиевой кислотой. Стероидные гормоны периодически получали 25 (62,5%), из них в средней дозе — 19,8±6,8 мг/сут (в пересчете на преднизолон). Эпизодически по требованию применяли нестероидные противовоспалительные препараты. Для лечения при ЖДА назначали сульфат железа (при легкой степени тяжести — 60–100 мг/сут элементарного железа, при средней — 200 мг/сут) до нормализации уровня гемоглобина (≥120 г/л), но не более чем на 2 мес (WHO, 2001). После нормализации концентрации гемоглобина проводимую терапию продолжали еще в течение 3 мес в дозе 60–100 мг/сут для восстановления депо железа в организме.

Исходно у всех больных и лиц контрольной группы, а также через 2 мес у больных 1-й группы после лечения сульфатом железа определяли уровень продукта ПОЛ — малонового диальдегида (МДА) и фермента антиоксидантной системы (АОС) — каталазы, а также еженедельно регистрировали повышение гемоглобина.

Забор крови пациентов для определения общеклинического анализа выполняли натощак из локтевой вены вакутайнером с К2EDTA (1 мг на 1 мл крови). Концентрацию гемоглобина определяли согласно инструкции на автоматическом гематологическом анализаторе «ABX Pentra 80» («Horiba АВХ diagnostics», Франция) с использованием комп­лекта тест-систем анализатора.

Вторичный продукт ПОЛ — МДА определяли спектрофотометрически: 1 мл плазмы крови смешивали с 1 мл 0,6% раствора тиобарбитуровой кислоты в присутствии 1 мл 30% раствора трихлоруксусной кислоты. Затем кипятили 15 мин на водяной бане, охлаждали, центрифугировали 15 мин при скорости 3000 об./мин. После этого образец фотометрировали при λ=532 нм. Расчет содержания МДА выполнялся по формуле:

где Е — экстинкция исследуемой пробы.

Состояние АОС оценивали по активности каталазы в крови, определяя скорость утилизации перекиси водорода в реакционной смеси, в которую вносили биологический материал (сыворотку крови), содержащий фермент: 0,1 мл сыворотки крови инкубировали с 2 мл 0,03% раствора перекиси водорода в течение 10 мин при температуре 20 ˚С. Затем добавляли 1 мл 4% раствора молибдата аммония, центрифугировали 30 мин при скорости 5000 об./мин. После этого образец фотометрировали при λ=410 нм. Расчет активности каталазы выполняли по формуле:

где ∆Е=Ех–І₀, Е_х — экстинкция контрольной пробы, Е₀ — экстинкция исследуемой пробы, 1332 — коэффициент пересчета. Обеспечение условий для оптимизации сопоставления и воспроизводимости результатов исследования достигали путем взятия крови у всех обследованных натощак, после 12-часового голодания, до еды и приема назначенных лекарственных средств.

Обработку результатов исследования выполняли на персональном компьютере с использованием пакета статистического анализа «MedStat». Для проверки распределения на нормальность использовали критерии W Шапиро — Уилка. При нормальном распределении данные приводили в виде среднее ± стандартное отклонение (М±s). Для сравнения средних двух независимых выборок, соответствующих нормальному закону распределения, использовали парный и непарный t-критерии Стьюдента. Корреляционные связи между парами количественных признаков при нормальном их распределении оценивали с помощью коэффициента линейной корреляции Пирсона (r). Во всех случаях проверки гипотез различия считались достоверными при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исходно у больных обеих клинических групп содержание МДА было достоверно (p<0,05) больше (1-я группа — 3,7±0,3; 2-я — 3,2±0,2 мкмоль/л), а уровень каталазы — ниже (1-я группа — 43,2±3,6; 2-я — 47,4±2,8 мккат/л) аналогичных показателей у здоровых лиц (1,85±0,48 мкмоль/л; 53,5±18,4 мккат/л). При этом указанные различия были более выражены у пациентов с анемией, причем повышение концентрации МДА и снижение уровня каталазы ассоциировались с более высокой степенью ее тяжести (табл. 1).

Различие между: *1а и 2-й группой (р<0,05); 1б и 2-й группой (р<0,05); подгруппами 1а и 1б (р<0,05).

Результаты статистического анализа свидетельствовали о том, что концентрация гемоглобина отрицательно коррелировала с уровнем МДА (r=–0,35; р<0,05) и положительно — с уровнем каталазы (r=+0,32; р<0,05).

Через 2 мес основной терапии у всех больных подгруппы 1а концентрация гемоглобина нормализовалась (124,1±3,7 г/л), что сопровождалось снижением уровня МДА, который стал сопоставим с показателем пациентов 2-й группы, в то время как уровень каталазы не изменился (табл. 2). У пациентов подгруппы 1б уровень гемоглобина не достиг нормы (113,2±5,8 г/л), при этом статистически значимых изменений ни МДА, ни каталазы не произошло.

*Различие в 1а подгруппе до и после лечения (р<0,05).

Таким образом, результаты проведенного нами исследования свидетельствуют о том, что у больных РА наблюдается активация процессов ПОЛ, особенно при наличии ЖДА, в то время как АОС угнетается. Кроме того, повышение уровня МДА и снижение концентрации каталазы у больных ассоциируется с более высокой степенью тяжести анемии. Вместе с тем, нормализация уровня гемоглобина на фоне применения препаратов железа сопровождается снижением активности ПОЛ, а их недостаточная эффективность ассоциируется с сохранением прооксидантно-антиоксидантного дисбаланса.

Известно, что при гипоксии (в том числе гемической) происходит активация процессов свободнорадикального окисления (Видиборець С.В., 1999). Так, в ряде исследований (Коган А.Х. и соавт., 1991; Дадали Ю.В. и соавт., 2000; Вишівська О.А. та співавт., 2004) у пациентов с ЖДА выявлело повышение уровня МДА и снижение уровней витамина Е, каталазы, глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы. Результаты нашего исследования также показали, что у больных РА и ЖДА происходит значительное усиление процессов ПОЛ и угнетение АОС, прогрессирующее по мере повышения степени тяжести анемии, что подтверждается наличием отрицательной корреляционной связи между уровнями продуктов ПОЛ и гемоглобина. Такая активация ПОЛ, вероятно, связана с тканевой гипоксией, а отсутствие адекватной реакции АОС — с хроническим характером процесса. При этом на фоне нормализации уровня гемоглобина происходит снижение активности ПОЛ, что подтверждается и рядом других исследований (Gurbuz N. et al., 2004; Kamanli A. et al., 2004).

Несмотря на то что сульфат железа является прооксидантом, полученная нами динамика показателей МДА свидетельствует о снижении активности ПОЛ на фоне его приема, что может быть обусловлено нормализацией уровня гемоглобина, которая сопровождается снижением процессов свободнорадикального окисления (Kurtoglu E. et al., 2003; Dyoretskii L.I. et al., 2006).

ВЫВОДЫ

1. У больных РА отмечается активация ПОЛ и угнетение АОС, которые наиболее выражены при наличии у них ЖДА.

2. Нормализация уровня гемоглобина под влиянием сульфата железа сопровождается снижением активности ПОЛ, а их недостаточная эффективность ассоциируется с сохранением прооксидантно-­антиоксидантного дисбаланса.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

• Видиборець С.В. (1999) Дослідження ефективності кверцетину у комплексному лікуванні хворих із залізодефіцитною анемією. Ліки, 3: 132–136.
• Вишівська О.А., Загородний М.І., Горчакова Н.О. та ін. (2004) Клініко-фармакологічні властивості флавоноїду кверцетину. Ліки, 2: 8–12.
• Дадали Ю.В., Дадали В.А., Макаров В.Г. (2000) Квантово-химический подход к антиоксидантной активности некоторых природых антиоксидантов. В кн.:Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. Материалы IV Междунар. съезда, 29 июня — 1июля 2000 г., Великий Новгород, с. 135–143.
• Коваленко В.М., Кузьміна Г.П., Маркова О.Я. (2010) Імовірність розвитку цитокін-медійованого анемічного синдрому у хворих на ревматоїдний артрит. Укр. ревматол. журн., 2: 33–38.
• Коган А.Х., Ершов В.И., Алекперова Г.Р. (1991) Состояние свободнорадикальных процессов при железодефицитных анемиях. Терапевт. арх., 63(7): 85–88.
• Мікулець Л.В., Волошин О.І. (2011) Вплив комплексного лікування з використанням кверцетину на добову організацію показників антиоксидантної і прооксидантної системи крові у хворих на ревматоїдний артрит. Буковин. мед. вісн., 15(2): 58.
• Cheng M.L., Ho H.Y., Tseng H.C. et al. (2005) Antioxidant deficit and enhanced susceptibility to oxidative damage in individuals with different forms of alphathalassaemia. Br. J. Haematol, 128(1): 119–127.
• Dyoretskii L.I., Zaspa E.A., Lityitskii P.F. et al. (2006) Free radical processes in patients with iron deficiency anaemia treated with iron medication. Ter. Arkh., 78: 52–57.
• Gurbuz N., Yalcin O., Aksu T.A. et al. (2004) The relationship between the enzyme activity, lipid peroxidation and red blood cells deformability in hemizygous and heterozygous glucose-6-phosphate dehydrogenase deficient individuals. Clin. Hemorheol. Microcirc, 31(3): 235–242.
• Iron Deficiency Anaemia: Assessment, Prevention and Control. World Health Organization (2001)ReportoftheWHO/UNICEF/UNUConsultation.Geneva, 2001.
• Kamanli A., Naziroğlu M., Aydilek N. et al. (2004) Plasma lipid peroxidation and antioxidant levels in patients with rheumatoid arthritis. Cell. Biochem. Funct., 22(1): 53–57.
• Kurtoglu E., Ugor A., Baltaci A. K. et al. (2003) Effect of iron supplementation on oxidative stress and antioxidant status in iron deficiency anemia. Biol. Trace Elem. Res., 96(3): 117–124.

Адрес для переписки:
Ватутин Николай Тихонович
83003, Донецк, просп. Ильича, 16
Донецкий национальный медицинский
университет им. Максима Горького,
кафедра внутренней медицины № 1
E-mail: a.smyrnova@mail.ru

No Comments » Додати свій

Leave a comment

Name (required)

Mail (will not be published) (required)

Website

Введите цифры, изображенные на картинке *